寡核苷酸可以通過(guò)硫醇-馬來(lái)酰亞胺和腙偶聯(lián)方法與抗體/蛋白質(zhì)偶聯(lián)。硫醇-馬來(lái)酰亞胺方法通常使用雙功能接頭（例如 SMCC）進(jìn)行。然而，SMCC修飾的蛋白質(zhì)極不穩(wěn)定，并且經(jīng)常自反應(yīng)，因?yàn)樗ǔ：邪泛土虼蓟鶊F(tuán)，導(dǎo)致大量的同源交聯(lián)。當(dāng)存在其他硫醇基團(tuán)時(shí)，共軛鍵可交換。在腙偶聯(lián)方法中，共軛反應(yīng)基于肼和醛之間的反應(yīng)。盡管使用了催化劑，但這種方法的收率很低。分子的大小和官能團(tuán)的不可接近性導(dǎo)致產(chǎn)量低。此外，聯(lián)動(dòng)穩(wěn)定性也是一個(gè)問(wèn)題。

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首先，抗體與LINK NHS酯反應(yīng)，將LINK引入抗體中。此外，胺修飾的寡核苷酸與MAGIC NHS酯反應(yīng)，將MAGIC引入寡核苷酸結(jié)構(gòu)中。其次，在純化活化后的寡核苷酸和抗體后，它們立即相互反應(yīng)，產(chǎn)生具有穩(wěn)定環(huán)連接的抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物。

原理示意圖：

注意事項(xiàng)：

1.單鏈寡核苷酸的堿基長(zhǎng)度是10-120個(gè)之間

2.雙鏈寡核苷酸的堿基長(zhǎng)度是80個(gè)以內(nèi)

3.寡核苷酸探針在合成時(shí)需要修飾，合成時(shí)備注好

4.待偶聯(lián)抗體或者蛋白的保存在PBS里面，濃度不低于1mg/ml。一般1-10mg/ml均可

5.活化后的寡核苷酸和活化后的抗體都要盡快使用，不要超過(guò)2小時(shí)

產(chǎn)品使用已發(fā)表文獻(xiàn)：

1.McMahon NP, Jones JA, Kwon S, et al. Oligonucleotide conjugated antibodies permit highly multiplexed immunofluorescence for future use in clinical histopathology. J Biomed Opt. 2020;25(5):1-18. doi:10.1117/1.JBO.25.5.056004

2.Wiener, J., Kokotek, D., Rosowski, S. et al. Preparation of single- and double-oligonucleotide antibody conjugates and their application for protein analytics. Sci Rep 10, 1457 (2020). doi.org/10.1038/s41598-020-58238-6